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酶標(biāo)儀在各個(gè)領(lǐng)域中的重要作用
點(diǎn)擊次數(shù)：5122 更新時(shí)間：2016-05-25
 　　自七十年代酶標(biāo)法提出以來(lái)，經(jīng)過(guò)不斷地發(fā)展現(xiàn)已成為檢驗(yàn)?zāi)承┲笜?biāo)的主要方法，與此同時(shí)，作為于微孔板比色的酶標(biāo)儀也獲得了很大的發(fā)展。

　　1、酶標(biāo)儀在血液檢驗(yàn)上的應(yīng)用

　　目前在國(guó)內(nèi)血站臨床試驗(yàn)室中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)已成為主要的免疫測(cè)定技術(shù)，由于大部分ELISA后以比色測(cè)定，使酶標(biāo)儀成其它各類(lèi)型酶標(biāo)儀為ELISA測(cè)定的重要工具。八十年代初，當(dāng)酶免疫測(cè)定技術(shù)從國(guó)外引進(jìn)時(shí)，基本上均使用肉眼判斷結(jié)果，難以滿(mǎn)足臨床測(cè)定要求。目前國(guó)內(nèi)醫(yī)院和血站實(shí)驗(yàn)室所使用的酶標(biāo)儀絕大部分為進(jìn)口儀器，品種型號(hào)多達(dá)數(shù)十種。

　　軟件功能是酶標(biāo)儀所具有的對(duì) ELISA定性和定量測(cè)定及其他測(cè)定方式如酶動(dòng)力學(xué)、紫外、凝集等的統(tǒng)計(jì)分析并報(bào)告結(jié)果的功能，是判斷酶標(biāo)儀質(zhì)量的一個(gè)指標(biāo)。ELISA 測(cè)定，酶標(biāo)儀需具有陽(yáng)性判斷值(Cutoff)及測(cè)定灰區(qū)的統(tǒng)計(jì)計(jì)算功能，如血站實(shí)驗(yàn)室篩選獻(xiàn)血員進(jìn)行抗 - HCV、HBSAG、抗 - HIV 測(cè)定時(shí)，常遇到測(cè)定吸光度處于Cutoff 附近，但又低于Cutoff 的樣品，這樣的血輸給患者導(dǎo)致輸血后傳染疾病的可能性增大。若設(shè)定灰區(qū)，以灰區(qū)下限作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，可減少輸血后傳染疾病的可能性。此外四參數(shù)測(cè)定的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)適合于定量酶免疫測(cè)定曲線(xiàn)的擬合。因此，如果目的為定量測(cè)定，要有這種曲線(xiàn)回歸方程計(jì)算分析功能。其他如連點(diǎn)、直線(xiàn)等回歸計(jì)算，可根據(jù)酶標(biāo)儀的應(yīng)用目的而定。

　　丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的測(cè)定，是對(duì)獻(xiàn)血者*的篩查項(xiàng)目之一。方法上有速率法和賴(lài)氏法等。若采用賴(lài)氏試管法，費(fèi)工、費(fèi)時(shí)，不但從方法上得不到統(tǒng)一，而且不利于計(jì)算機(jī)對(duì)原始數(shù)據(jù)的網(wǎng)絡(luò)化管理。若采用微板酶標(biāo)儀定量(U/L)方法，利用酶標(biāo)儀與計(jì)算機(jī)接口，聯(lián)接血站局域網(wǎng)絡(luò)，這就同其他酶法檢測(cè)項(xiàng)目一樣，實(shí)現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)室原始數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)管理。

　　采用試管法檢測(cè)Rh血型，操作繁鎖，肉眼判讀結(jié)果缺乏客觀性。故將平底微板法與酶標(biāo)儀掃描，電腦自動(dòng)判讀打印技術(shù)相結(jié)合，用TCEAN全自動(dòng)加樣分析系統(tǒng)完成。經(jīng)常規(guī)13032份標(biāo)本的檢測(cè)，符合率達(dá)100%。利用酶標(biāo)儀法檢測(cè)Rh血型具有較好的重復(fù)性、準(zhǔn)確性，操作簡(jiǎn)便快速、判讀結(jié)果客觀可靠，也易于原始結(jié)果的保存，提高自動(dòng)化程度，能的篩選獻(xiàn)血者，有利于實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化管理，也有利于血站稀有血型庫(kù)的建立。

　　2、酶標(biāo)儀在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用

　　在自然界中，無(wú)論是脊椎動(dòng)物還是無(wú)脊椎動(dòng)物(包括昆蟲(chóng))、植物或微生物，酚氧化酶在其生命過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用。在昆蟲(chóng)體內(nèi)，它對(duì)昆蟲(chóng)的變態(tài)發(fā)育和免疫系統(tǒng)起著重要作用。酚氧化酶催化完成的“醌鞣化”作用可以促進(jìn)昆蟲(chóng)表皮的硬化與黑化，這個(gè)過(guò)程對(duì)于具有“外骨骼”的昆蟲(chóng)生命過(guò)程關(guān)重要。因此酚氧化酶抑制劑的研究正是為當(dāng)今農(nóng)藥的發(fā)展提供了重要線(xiàn)索。那么采用何種、簡(jiǎn)便的的方法來(lái)研究酚氧化酶抑制劑對(duì)酚氧化酶的影響?我們可以運(yùn)用酶標(biāo)儀微量法來(lái)進(jìn)行這方面的研究。例如以LDOPA 為底物，采用酶標(biāo)儀微量法研究了化合物2-羥基-4-甲氧基苯甲醛縮苯胺對(duì)酚氧化酶的影響。利用酶標(biāo)儀旨在為酚氧化酶研究提供更便捷的方法，也為開(kāi)發(fā)以該酶為靶標(biāo)的新型害蟲(chóng)控制劑提供理論依據(jù)。

　　3、酶標(biāo)儀在食品安全方面的應(yīng)用

　　伏馬菌素是近發(fā)現(xiàn)的一族主要由幾種真菌產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)相關(guān)的毒素代謝產(chǎn)物，主要包括FB1，F(xiàn)B2和FB3。FI能引起馬腦白質(zhì)軟化癥，豬肺水腫及大鼠腎及肝癌。流行病學(xué)研究顯示部分地區(qū)食道癌的高發(fā)率與玉米中含伏馬菌素(1.0-2.0mg/kg)有關(guān)。毒物學(xué)研究表明少量的FB2和FB3的潛在的致癌作用與FBl類(lèi)似。癌癥研究機(jī)構(gòu)與加利福尼亞環(huán)境保護(hù)機(jī)構(gòu)已宣布伏馬菌素為人類(lèi)潛在的致癌物質(zhì)。該毒素已被世界衛(wèi)生組織列為近年來(lái)行研究的幾種霉菌毒素之一。因此快速、的檢測(cè)伏馬菌素便顯得尤為重要，應(yīng)用固相直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附原理，用70%甲醇從研磨樣品中提取伏馬菌素。萃取出的樣品液與酶標(biāo)記的伏馬菌素混合加入到抗體包被的微孔中，樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的伏馬菌素與酶聯(lián)偶合劑競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合孔中的特異抗體。經(jīng)過(guò)洗滌步驟后，當(dāng)酶的底物被加入到微孔中，顏色變?yōu)樗{(lán)色，且顏色深淺與樣品中伏馬菌素含量成反比。加入反應(yīng)終止液終止反應(yīng)后，顏色應(yīng)由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。在450nm或630nm的濾鏡下使用酶標(biāo)儀對(duì)微孔板進(jìn)行光學(xué)測(cè)量。將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的光密度值進(jìn)行比較后確定得出的結(jié)果。

　　4、酶標(biāo)儀在微生物學(xué)的應(yīng)用

　　生長(zhǎng)曲線(xiàn)一般指菌落總數(shù)CFU/mI?；蛘呔淇倲?shù)的對(duì)數(shù)log CFU/ml。隨時(shí)間變化曲線(xiàn)，可用來(lái)展示微生物生長(zhǎng)情況和新陳代謝規(guī)律。由于受試菌數(shù)量/濃度與菌懸液的光學(xué)密度(optical density，OD)值成正比，所以生長(zhǎng)曲線(xiàn)也常用OD-t曲線(xiàn)表示。目前菌懸液OD值主要通過(guò)可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定，其在評(píng)價(jià)微生物生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)可以得到滿(mǎn)意的結(jié)果。但是該方法存在一定缺點(diǎn)：即時(shí)性差;需反復(fù)采樣，操作繁瑣;取樣和檢測(cè)過(guò)程中培養(yǎng)基容易感染雜菌;作為懸濁液，細(xì)菌有一定的沉降速率，檢測(cè)時(shí)間的長(zhǎng)短會(huì)對(duì)OD值產(chǎn)生影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)再現(xiàn)較為困難。由于酶標(biāo)儀是一種快速、準(zhǔn)確、高通量的儀器，所以我們總會(huì)選擇使用酶標(biāo)儀來(lái)進(jìn)行菌懸液OD值的測(cè)定，來(lái)提高工作效率，節(jié)約時(shí)間。

　　除測(cè)定菌懸液OD值外，酶標(biāo)儀還可用來(lái)檢測(cè)細(xì)菌濃度。例如：各類(lèi)紡織品與人類(lèi)生活關(guān)系密切，其表面附著的微生物可能是疾病傳播的重要媒介或與體表微生物相伴形成一種有機(jī)的微生態(tài)關(guān)系。隨著時(shí)代的發(fā)展，各種抗菌織物產(chǎn)品不斷出現(xiàn)，但對(duì)評(píng)價(jià)抗菌紡織品的

　　抑菌效果尚無(wú)規(guī)范的方法，所以，建立一種科學(xué)評(píng)價(jià)織品抗菌效果的方法對(duì)衛(wèi)生微生物學(xué)和微生態(tài)學(xué)研究均具有重要價(jià)值。由于活菌計(jì)數(shù)誤差較大而且工作繁瑣，不適用于大批量標(biāo)本的檢測(cè)，因而利用酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)菌濃度便可建立檢測(cè)織品抑菌效果的有效方法。

　　5、酶標(biāo)儀室內(nèi)質(zhì)量控制

　　酶標(biāo)儀是臨床檢驗(yàn)科和血站常用的免疫學(xué)檢測(cè)儀器之一，它通過(guò)吸光度測(cè)定，對(duì)被檢標(biāo)本作出定性或定量報(bào)告，但影響其測(cè)定結(jié)果的因素較多，而現(xiàn)有的血清學(xué)質(zhì)控方法是對(duì)免疫學(xué)檢驗(yàn)的全過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制，包括加樣、保溫、洗滌、顯色、終止和比色等步驟，一旦出現(xiàn)失控，很難判斷是試劑的原因、儀器的原因或是操作人員本身的因素，為了明確地了解儀器的工作狀態(tài)，我們建立了一種酶標(biāo)儀室內(nèi)質(zhì)量控制方法。如這種簡(jiǎn)單的酶標(biāo)儀室內(nèi)質(zhì)量控制方法，它采用甲基橙溶液作為質(zhì)控物，用質(zhì)控圖法對(duì)酶標(biāo)儀492nm波長(zhǎng)進(jìn)行質(zhì)控，其結(jié)果不受免疫檢驗(yàn)過(guò)程中加樣、保溫、洗滌、顯色、終止和比色等步驟的影響，可直接反映儀器本身的性能，方法簡(jiǎn)單、效果良好。