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　　NanoDrop 2000分光光度計比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光，但是精度再高的儀器，即使是雙單色器的分光光度計，也只能獲得近乎單色的光，無法獲得純單色光，它仍然含有狹窄光通帶，具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離。

 

　　固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調(diào)狹縫的可以做到0.1nm；可見分光光度計帶寬6nm、snm，甚十幾納米。

 

　　光譜帶寬應(yīng)該是越小越好，但是，隨著光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低，所以，選擇儀器時要綜合考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時，可近似認(rèn)為符合比耳定律。

 

　　2.雜散光的影響

 

　　雜散光是指進人檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分，它是光譜測量中誤差的主要來源。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計產(chǎn)生原因有：

 

　　分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長處，由于單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著。

 

　　雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測量誤差，實際工作中，在定量分析時，一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度，如果在分析波長處含有雜散光，這時樣品的透光率較小，而雜散光大部分透過，使測量吸光度低于真實吸光度。

 

　　3.儀器噪聲對測t的影響

 

　　NanoDrop 2000分光光度計噪聲也是儀器的一個重要指標(biāo)，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號，掃描100%T和0%T線，可觀察到分光光度計的噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會掩蓋較小的測量信號，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。

 

　　4.波長和吸光度準(zhǔn)確度

 

　　樣品的每一個值都是在一定的波長下測得的，如果，波長誤差很大，測出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對儀器的直接要求，更應(yīng)引起足夠的重視。

 

　　國家計量檢定規(guī)程規(guī)定NanoDrop 2000分光光度計透射比準(zhǔn)確度為*士0.6%， B級土1.0%。

 

　　NanoDrop one分光光度計作為一種精密儀器，在運行工作過程中由于工作環(huán)境，操作方法等種種原因，其技術(shù)狀況必然會發(fā)生某些變化，可能影響設(shè)備的性能，甚誘發(fā)設(shè)備故障及事故。因此，分析工作者必須了解分光光度計的基本原理和使用說明，并能及時發(fā)現(xiàn)和排除這些隱患，對已產(chǎn)生的故障及時維修才能保證儀器設(shè)備的正常運行。

 

　　1、若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。

 

　　2、指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。

 

　　3、比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。

 

　　4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。

 

　　5、NanoDrop one分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預(yù)熱時，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。

 

　　6、放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。

 

　　7、比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進行每次測試前均應(yīng)進行比較。具體方法如下；分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把1600便攜式分光光度計置于某一波長處，石英比色杯；220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調(diào)100%，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計是有哪幾個部分組成的？

 

　　紫外可見分光光度計是有哪幾個部分組成的？是很多朋友們想要知道的，業(yè)內(nèi)相關(guān)專家介紹，這種設(shè)備往往是有光學(xué)系統(tǒng)、電光系統(tǒng)、光電系統(tǒng)、電子系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)和輸出打印系統(tǒng)等部分組成。

 

　　光學(xué)系統(tǒng)：紫外可見分光光度計這種部分系統(tǒng)又包括外光路系統(tǒng)和單色器兩個主要部分，其中外光路和單色器各有很多類型，單色器就是這種設(shè)備用于散光的主要來源，也是整機在使用時候主要分析誤差的來源之一。

 

　　電光系統(tǒng)：這種部分又包括鎢燈和相應(yīng)的電源組成，在該設(shè)備中對整體的穩(wěn)定性會有很大影響的，這種設(shè)備也是儀器不穩(wěn)定的主要原因之一。

 

　　光電系統(tǒng)：這種部分就是能夠?qū)⒐庑盘栕優(yōu)殡娦盘柕年P(guān)鍵部件，不但會直接影響到儀器的靈敏度和適用范圍，而且也有光電管、光電倍增管、硅光電池和二級管陣列等。

 

　　電子系統(tǒng)：這種部分主要有放大器、A/D變換器等組成，其中放大器就是影響整機靈敏度和穩(wěn)定性的主要部件，當(dāng)然了這種部件還是噪聲的主要來源，會直接影響到紫外可見分光光度計設(shè)備的分析誤差。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計原理 ：

 

　　分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光譜圖再結(jié)合其它手段進行定性分析。

 

　　根據(jù)Lambert-Beer定律：A=εbc，（A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，為液池厚度，c為溶液濃度）可以對溶液進行定量分析。

 

　　你可以用紫外NanoDrop 2000分光光度計測定定三種農(nóng)藥的波長在某溶液中的大、小吸收波長。

 

　　配制溶液-在光譜檢測項下進行-調(diào)整檢測光譜范圍及速度--掃描光譜圖--吸光度大處對應(yīng)波長為吸收波長，吸光度小處對應(yīng)的波長為小吸收波長。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計種類繁多，但不外乎簡易型、中檔型和型三大類。我們在選用分光光度計時需要考慮以下幾個方面：

 

　　1.波長檢測范圍，波長選擇方式：越的儀器波長檢測范圍越寬，當(dāng)然價格也較高，用戶需要根據(jù)自己的需求選擇合適的波長范圍；對于簡單型的儀器，波長選擇方式一般是手動查找，這種方式的重復(fù)性較差，型的儀器中波長可以按照設(shè)定模式自動查找或掃描，其次型的波長掃描速度的檔位也會增加。

 

　　2.光束：光束類型分為單光束型，雙光束型或準(zhǔn)雙光束型。單光束一般適于在給定波長處測量吸光度，不能作全波段光譜掃描，并且要求光源和檢測器具有很高的穩(wěn)定性；雙光束可以自動記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩(wěn)定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析；假雙光束也就是比例雙光束，優(yōu)點是可以監(jiān)測光源變化帶來的誤差，它的原理是由同一單色器發(fā)出的光被分成兩束，一束直接到達(dá)檢測器，另一束通過樣品后到達(dá)另一個檢測器。但是這種方式并不能消除參比造成的影響。

 

　　3.光源：可見光區(qū)主要用鎢燈，鹵鎢（320～2500nm）；紫外區(qū)主要用氫燈，氘燈（180～375nm）；氙燈在紫外和可見光區(qū)均可用作光源。

 

　　4.樣品支架：簡單的樣品支架為推拉式四聯(lián)池架，一次只能測量一個樣品，參比和樣品分兩次測量；型的樣品池支架為兩個固定式，分別是樣品通道和參比通道，可以同時測量參比和樣品的吸光值。

 

　　5.狹縫：簡易型的狹縫一般是固定寬度模式，狹縫寬度多數(shù)為2nm,也有1.5nm的；型的儀器狹縫均為連續(xù)可調(diào)型，可以適應(yīng)高分辨率的需要。

 

　　6.光學(xué)性能指標(biāo)：光學(xué)性能的高低直接影響到測量的準(zhǔn)確性，其中光柵的技術(shù)指標(biāo)尤為重要。型儀器的光柵質(zhì)量較好，一般的光柵為凹面型，并且大尺寸的凹面光柵對應(yīng)的刻槽數(shù)越多，因此在分辨率和雜散光方面指標(biāo)要優(yōu)于簡易型儀器。

 

　　7.檢測器：檢測器是利用光電效應(yīng)，將透過溶液的光信號轉(zhuǎn)換為電信號，并將電信號放大的裝置。簡易型儀器一般采用光敏二極管；中檔型儀器采用硅光二極管；型儀器的檢測器使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測器。

 

　　8.顯示器：簡易型儀器多為機械表頭或數(shù)碼管顯示器，沒有數(shù)據(jù)處理器；型儀器的顯示器為液晶式或連接電腦，數(shù)據(jù)處理可由儀器自身具有的或外接計算機處理。

 

　　9.測量模式：NanoDrop 2000分光光度計多為定點（固定波長）吸光度或透過率測量方式，基本不能進行波長掃描測量；型儀器的測量模式較多，可以顯示透過率、吸光度、濃度直接讀數(shù)、單光束，單點及掃描均可。

 

　　10.測量附件：衡量儀器質(zhì)量高低的重要方面是看儀器是否具有豐富的附屬測量器件，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動進樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件。

 

　　11.測量樣品的狀態(tài)：可見和NanoDrop 2000分光光度計一般測量液態(tài)樣品，紅外分光光度計一般能分析各種狀態(tài)（氣、液、固）的試樣。