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　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)原理使用說(shuō)明

 

　?。?）預(yù)熱是保證儀器精度和穩(wěn)定性的重要步驟。

 

　?。?）試管的潔凈度直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，洗碗是特別重要的。用自來(lái)水反復(fù)沖洗用過(guò)的小杯，再用蒸餾水沖洗，倒立在濾紙上，晾干后放回小杯盒中。如有必要，對(duì)對(duì)比色盤進(jìn)行更細(xì)致的處理，如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡，沖洗干凈。

 

　?。?）試管與分光光度計(jì)應(yīng)同時(shí)使用，否則會(huì)造成較大的實(shí)驗(yàn)誤差。不能用刀代替1.37200光柵分光光度計(jì)。

 

　?。?）彩皿中的液體應(yīng)達(dá)到其容量的2/3，太少會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，太多會(huì)在測(cè)量過(guò)程中容易溢出并污染儀器。試管內(nèi)的樣品裝載量應(yīng)在2/3和3/4之間。

 

　　（5）在操作小杯時(shí)，應(yīng)抓住“粗糙表面”，防止與“光滑表面”接觸而通過(guò)光路。如果小杯表面有液體，用絲綢布擦干，以確保不會(huì)影響平滑的路徑。

 

　?。?）待測(cè)溶液濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)選用光徑較短的試管。吸光度讀數(shù)一般應(yīng)在0.1 ~ 0.8之間。由于毛坯的測(cè)量、標(biāo)準(zhǔn)和溶液的測(cè)試使用的是相同光徑的試管，所以不需要考慮光徑變化所帶來(lái)的影響。

 

　　在NanoDrop 2000分光光度計(jì)的測(cè)定過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)同一溶液在不同時(shí)間的測(cè)定結(jié)果不同，即重復(fù)性不佳。造成這種差異的原因是什么？除判斷錯(cuò)誤的因素外，可能的原因如下：

 

　　1、可見(jiàn)光分光光度計(jì)預(yù)熱時(shí)間不夠或預(yù)熱方法不正確，應(yīng)延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間或使用正確的預(yù)熱方法。

 

　　2、由于長(zhǎng)期使用，光電變換器的光電轉(zhuǎn)換效率發(fā)生了變化。此時(shí)標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液的吸光度均降低，在相對(duì)定量的情況下對(duì)結(jié)果影響不大。但是，對(duì)于這類儀器，一般建議連續(xù)使用時(shí)間不超過(guò)3h，如果需要較長(zhǎng)時(shí)間，間歇使用30min。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)的其他問(wèn)題

 

　　1、發(fā)現(xiàn)在測(cè)量過(guò)程中一些不良操作不利于儀器的維護(hù)，用戶應(yīng)盡量避免。如對(duì)上述儀器進(jìn)行操作（如澆注溶液）；吸收器置于儀器的表面板上。在實(shí)驗(yàn)室中與不同儀器的吸收罐混合使用。

 

　　2、防塵防潮，分光光度計(jì)NanoDrop 2000一般采用塑料布蓋，不使用時(shí)將整個(gè)儀器蓋住，是一種很好的防塵方法。然而，我發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室并不需要附加一個(gè)塑料布蓋，但是我使用的是普通的布蓋或由布蓋制成的儀器，除塵效果不如塑料布蓋理想。此外，在塑料布蓋上只放幾袋防潮硅膠，也能更好地發(fā)揮延長(zhǎng)防潮效果。在防潮時(shí)，如果可見(jiàn)分光光度計(jì)帶有防潮干燥筒，應(yīng)經(jīng)常檢查，發(fā)現(xiàn)變色后立即更換新的或待干燥后再使用。

 

　　NanoDrop 2000分光光度計(jì)種類繁多，但有三種類型：簡(jiǎn)單型、中等類型和類型。選擇分光光度計(jì)時(shí)需要考慮以下幾個(gè)方面：

 

　　1、波長(zhǎng)檢測(cè)范圍和波長(zhǎng)選擇方法：儀器波長(zhǎng)檢測(cè)范圍越寬，價(jià)格越高，當(dāng)然用戶需要根據(jù)自己的需要選擇合適的波長(zhǎng)范圍；對(duì)于簡(jiǎn)單的儀器，波長(zhǎng)的選擇方法一般是手工搜索，這種重復(fù)性較差，儀器中的波長(zhǎng)可以根據(jù)自動(dòng)搜索或掃描的方式設(shè)置，第二種類型的波長(zhǎng)掃描速度齒輪也會(huì)增加。

 

　　2、梁式：梁式可分為單梁式、雙梁式或準(zhǔn)雙梁式。單光束一般適用于測(cè)量給定波長(zhǎng)的吸光度，不能用于全光譜掃描。雙光束可自動(dòng)記錄，快速全波段掃描。它可以消除光源不穩(wěn)定、探測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適用于結(jié)構(gòu)分析；偽雙光束的優(yōu)點(diǎn)是可以監(jiān)測(cè)光源變化引起的誤差。其原理是將同一單色儀發(fā)出的光分為兩束，一束直接到達(dá)檢測(cè)器，另一束通過(guò)樣品后到達(dá)檢測(cè)器。但是，這種方法并沒(méi)有消除引用的影響。

 

　　3、光源：鎢絲燈和鹵鎢燈（320 ~ 2500nm）主要用于可見(jiàn)光區(qū)；紫外區(qū)主要采用氫燈和氘燈（180-375nm）。氙氣燈可作為紫外和可見(jiàn)光的光源。

 

　　4、樣本支持：簡(jiǎn)單樣本支持為推拉四連桿池框架，一次只能測(cè)量一個(gè)樣本，基準(zhǔn)和樣本兩次測(cè)量；樣品池支架的類型為兩種固定類型，分別為樣品通道和參考通道，可以同時(shí)測(cè)量參考和樣品的吸光值。

 

　　5、狹縫：簡(jiǎn)單的狹縫類型一般為定寬模式，狹縫寬度大多為2nm，或1.5nm;該儀器的狹縫是連續(xù)可調(diào)的，可適應(yīng)高分辨率的需要。

 

　　6、光學(xué)性能指標(biāo)：光學(xué)性能的好壞直接影響測(cè)量的精度，其中光柵的技術(shù)指標(biāo)尤為重要。光柵質(zhì)量較好，一般光柵為凹面光柵，與大尺寸凹面光柵對(duì)應(yīng)的凹面光柵槽數(shù)較多，因此分辨率和雜散光指數(shù)優(yōu)于簡(jiǎn)單儀器。

 

　　7、檢測(cè)器：檢測(cè)器是將光信號(hào)通過(guò)溶液轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，利用光電效應(yīng)放大電信號(hào)的裝置。簡(jiǎn)單儀器一般采用光電二極管；中間型儀器采用硅光電二極管；I型儀器使用高靈敏度光電倍增管和紅外探測(cè)器。

 

　　8、顯示：簡(jiǎn)易儀器大多為機(jī)械表頭或數(shù)碼管顯示，無(wú)數(shù)據(jù)處理器；儀器顯示為液晶顯示或與計(jì)算機(jī)連接，數(shù)據(jù)處理可由儀器本身或外部計(jì)算機(jī)進(jìn)行。

 

　　9、測(cè)量方式：NanoDrop 2000分光光度計(jì)主要是定點(diǎn)（固定波長(zhǎng)）吸光度或透射率測(cè)量，波長(zhǎng)掃描測(cè)量基本不可能；可顯示透射率、吸光度、濃度直讀、單光束、單點(diǎn)掃描。

 

　　10、測(cè)量附件：測(cè)量?jī)x器質(zhì)量的一個(gè)重要方面是看儀器是否有豐富的輔助測(cè)量設(shè)備，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動(dòng)采樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件等。

 

　　11、被測(cè)樣品狀態(tài)：NanoDrop 2000分光光度計(jì)一般測(cè)量液體樣品，紅外分光光度計(jì)一般可以分析各種狀態(tài)的樣品（氣體、液體和固體）。